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貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)Biomek i-series自動(dòng)化工作站與SCIEX BioPhase? 8800高通量毛細(xì)管電泳在大樣本量單抗CE-SDS純度分析中的應(yīng)用——同時(shí)分析不同濃度及不同前處理方式的樣品。

CE-SDS技術(shù)在蛋白藥物研發(fā)和質(zhì)控中至關(guān)重要。藥物開(kāi)發(fā)各個(gè)階段都有大量CE-SDS檢測(cè)需要。特別是隨著藥物種類(lèi)的多樣化，單抗、雙抗、融合蛋白和ADC等，不同類(lèi)型蛋白藥物CE-SDS檢測(cè)的樣品前處理?xiàng)l件也變得多樣。生物藥研發(fā)中，對(duì)CE-SDS提出更高的檢測(cè)效率和通量需求，同時(shí)要求保持高分析靈敏度和分辨率，以?xún)?yōu)化研發(fā)流程，縮短產(chǎn)品研發(fā)周期，加快新藥上市步伐。 

SCIEX高通量毛細(xì)管電泳BioPhase? 8800系統(tǒng)

• 采用8通道毛細(xì)管并行處理樣品，契合生物藥研發(fā)通量效率和分析靈敏度的要求。

同時(shí)，與高通量檢測(cè)相伴而行的是：如何提供同樣高通量、高效率的樣品前處理。

貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)Biomek i系列自動(dòng)化工作站

• 支持全自動(dòng)完成CE-SDS樣品前處理，省去大量人工操作，消除潛在錯(cuò)誤和誤差。

BioPhase? 8800與Biomek的聯(lián)合，帶來(lái)蛋白藥物純度高速分析的全新時(shí)代。

近期，貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)與SCIEX聯(lián)合開(kāi)發(fā)的Biomek與BioPhase? 8800聯(lián)用方案再次重磅升級(jí)。在之前方案測(cè)試前處理速度和96個(gè)樣本重復(fù)性的基礎(chǔ)上2（?重磅！全自動(dòng)、高通量CE-SDS樣品前處理及分離分析流程來(lái)了?。?，本次升級(jí)測(cè)試針對(duì)生物藥研發(fā)CE-SDS檢測(cè)中面臨的一次實(shí)驗(yàn)檢測(cè)多種不同類(lèi)型樣品，包括濃度各異，樣品和試劑混合比例不同，前處理樣品緩沖類(lèi)型或pH不同，需要檢測(cè)非還原或還原等復(fù)雜場(chǎng)景，考察方法學(xué)重復(fù)性、線性等，進(jìn)一步探索自動(dòng)化代替人工操作的適用性和可靠性。

圖1. Biomek i5 Span8自動(dòng)化移液工作站（上），高通量毛細(xì)管電泳BioPhase? 8800系統(tǒng)（中），BioPhase CE-SDS蛋白分子量&純度分析試劑盒（下）

結(jié)果展示

01Biomek i-series同時(shí)執(zhí)行多個(gè)樣品不同前處理流程的便捷性考察

以mAb-2和mAb-3兩種抗體測(cè)試多樣品復(fù)雜前處理場(chǎng)景：

01  mAb-2及mAb-3初始濃度不同；

02  mAb-2分別與兩種不同pH樣品緩沖液混合； 

03  mAb-3同時(shí)做非還原和還原實(shí)驗(yàn)。

整個(gè)前處理過(guò)程不同樣品取樣量不同，添加試劑類(lèi)型不同，體積不同，如果人工操作非常容易取錯(cuò)試劑或加錯(cuò)位置導(dǎo)致失誤，造成結(jié)果異常。

使用Biomek i-series自動(dòng)執(zhí)行前處理操作，根據(jù)待移取試劑所在試劑槽不同，同時(shí)或依次吸取不同來(lái)源孔、不同體積的試劑或樣品。Biomek i-series自動(dòng)調(diào)整每根移液probe的移液量和間距，按照最短路徑加入BioPhase? 8800樣品盤(pán)預(yù)設(shè)位置。全實(shí)驗(yàn)流程測(cè)試中，

Biomek i-series自動(dòng)化工作站能便捷地完成復(fù)雜場(chǎng)景下的CE-SDS樣品前處理。

02Biomek i-series抗體稀釋準(zhǔn)確性考察

對(duì)mAb-1抗體樣品進(jìn)行自動(dòng)化樣品稀釋準(zhǔn)確性考察。3份稀釋后的樣品實(shí)測(cè)濃度與理論濃度接近，三個(gè)重復(fù)樣品的實(shí)測(cè)濃度重復(fù)性好，RSD值為2.53%。結(jié)果表明Biomek i-series自動(dòng)化移液工作站稀釋樣品準(zhǔn)確性高，樣品稀釋30.65倍，母液移取量?jī)H1.2 μL仍獲得很好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

表1. Biomek i-series自動(dòng)化移液工作站稀釋樣品準(zhǔn)確性結(jié)果 (n=3)

03不同樣品不同CE-SDS前處理結(jié)果重復(fù)性考察

mAb-2和mAb-3抗體以不同CE-SDS處理方式各平行制備3份。從表2和表3結(jié)果可見(jiàn)，即使Biomek自動(dòng)化工作站一次性執(zhí)行了多種不同的移液過(guò)程，平行制備的3份樣品遷移時(shí)間重復(fù)性RSD值為0.16%-0.47%，校準(zhǔn)峰面積百分比重復(fù)性RSD值為0.02%-0.48%。結(jié)果表明，Biomek i-series自動(dòng)化工作站平行制樣準(zhǔn)確度高，且BioPhase 8800不同通道毛細(xì)管重復(fù)性較好。

表2. mAb-2在不同pH樣品緩沖液，非還原處理下的重復(fù)性結(jié)果 (n=3)

表3. mAb-3在還原和非還原前處理下的重復(fù)性結(jié)果 (n=3)

04線性準(zhǔn)確度考察

抗體樣品mAb-4在Biomek i-series自動(dòng)化工作站進(jìn)行逐級(jí)稀釋?zhuān)⑴c其他試劑混合制備CE-SDS-NR和CE-SDS-R樣品，處理好的樣品盤(pán)轉(zhuǎn)移至BioPhase? 8800系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。從圖2非還原主峰 (NR) 和還原輕鏈 (R-LC) 、重鏈 (R-HC) 、非糖基化重鏈 (R-NGHC) 幾個(gè)峰的線性結(jié)果看，各峰在0.1-2.0 mg/mL濃度下線性結(jié)果良好，非還原和還原的R2均在0.99以上，說(shuō)明當(dāng)前Biomek與BioPhase 8800聯(lián)用方案線性準(zhǔn)確度好。

圖2. mAb-4樣品CE-SDS-NR以及CE-SDS-R線性結(jié)果

Biomek i-series與BioPhase? 8800聯(lián)用方案主要優(yōu)勢(shì)

① 操作便捷，減少人為錯(cuò)誤

貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)Biomek i-series自動(dòng)化工作站可同時(shí)進(jìn)行多樣本復(fù)雜CE-SDS前處理，可適應(yīng)樣品濃度不同，試劑體積不同，試劑類(lèi)型不同等場(chǎng)景，顯著減少前處理人工步驟。8通道移液器可自動(dòng)同時(shí)吸取不同體積的試劑加入對(duì)應(yīng)樣品孔，減少人工操作的誤差和失誤。

② 穩(wěn)定性好，重復(fù)性高

• 聯(lián)用方案結(jié)果準(zhǔn)確度高，高濃度小體積稀釋樣品測(cè)量濃度與理論濃度接近，且RSD%小于3%；

• 不同樣品不同前處理方式制備的CE-SDS樣品，每個(gè)樣品CE-SDS結(jié)果重復(fù)性好，主峰遷移時(shí)間和校正峰面積百分比的重復(fù)性均小于1%；

• 逐級(jí)稀釋制備6個(gè)不同濃度的CE-SDS-NR和CE-SDS-R樣品，線性化結(jié)果良好，非還原主峰和還原LC、HC、NGHC峰的線性曲線R2均大于0.99。

參考文獻(xiàn)：

1.SCIEX Tech note：Biomek i-series自動(dòng)化移液工作站與BioPhase? 8800高通量毛細(xì)管電泳在大樣本量單抗CE-SDS純度分析中的應(yīng)用——同時(shí)分析不同濃度及不同前處理的樣品（MKT-33395-A）

2. SCIEX Tech note：Biomek i-series自動(dòng)化移液工作站與BioPhase? 8800聯(lián)合用于單抗CE-SDS純度分析（RUO-MKT-02-15616-ZH-A）