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分離三萜香樹(shù)脂醇的方法

香樹(shù)脂醇屬于三萜類(lèi)的天然產(chǎn)物，它們有一個(gè)雙鍵，結(jié)構(gòu)為五環(huán)三萜醇。自然界中的香樹(shù)脂醇通常以 α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇形式存在，它們互為同分異構(gòu)體。其中 β-香樹(shù)脂醇，又稱(chēng)白樺酯醇，具有較高的藥用價(jià)值，能抑制膽固醇和甘油三酯合成，有效預(yù)防肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥和 2 型糖尿病。

作為兩個(gè)極性接近的同分異構(gòu)體，如何利用色譜法有效分離和收集 α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇一直是天然產(chǎn)物界的研究課題之一。

由于香樹(shù)脂醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)特性，在 HPLC-UV 上會(huì)采用 200nm 左右的吸收波長(zhǎng)來(lái)檢測(cè)，很容易受到溶劑或其他雜質(zhì)的影響，而且分離時(shí)間也比較長(zhǎng)。如圖 1 采用 250×3mm I.D，3μm 的 C18 色譜柱分離一系列三萜化合物的混合物。

圖1、用 HPLC-UV 分離羽扇豆醇（L1），羽扇烯酮（L3），α-香樹(shù)脂醇（αAm），β-香樹(shù)脂醇（βAm），δ-香樹(shù)脂醇（δAm），乙酸環(huán)阿屯酯（C2）, β-谷甾醇（S2）以及豆甾醇（S1）混合物，流動(dòng)相為 6.5%水/93.5% 乙腈。

本文介紹了一種利用 BUCHI Sepiatec SFC 儀器分離 α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇的方法。SFC 儀器與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)相連。為了提高生產(chǎn)效率，采用了堆疊注入模式。

▲ BUCHI Sepiatec SFC-50

 1實(shí)驗(yàn)條件

▲ 圖2、香樹(shù)脂醇經(jīng)過(guò) 11 次疊層進(jìn)樣，

分離為 α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇

 2結(jié)果與討論

由于 α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇之間沒(méi)有基線(xiàn)分離，所以分為三組餾分收集，中間部分重新注入以提高回收率。在圖 1 的 HPLC-UV 分離方法中，α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇的出峰時(shí)間為 20-25 分鐘，基線(xiàn)部分波動(dòng)較大。在圖 2 中，SFC-ELSD 采用 11 次疊層進(jìn)樣，總時(shí)長(zhǎng)為 18 分鐘，相比 HPLC 法效率更加高，基線(xiàn)也更加平穩(wěn)。在餾分收集方面，得益于疊層進(jìn)樣和主要溶劑為 85% CO2，可以在收集大量樣品的同時(shí)減少溶劑后處理的時(shí)間。

 3結(jié)論

α-香樹(shù)脂醇和 β-香樹(shù)脂醇可以用 Sepiatec SFC-50 有效分離，結(jié)合 ELSD 可實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)率的檢測(cè)和連續(xù)分餾。